久久96热在精品国产三级,在线不卡日本v二区到六区,亚洲久久久一区二区三区,品久久久久久久久久久久

咨詢熱線

15000266580

當前位置:首頁  >  技術文章  >  細胞株的篩選需要注意哪些因素

細胞株的篩選需要注意哪些因素

更新時間:2020-02-25      點擊次數:2427
   細胞株在生物制藥中使用非常廣泛,細胞株培養條件簡單,貼壁強度適中,比較容易轉染,很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。細胞培養過程中的污染不僅僅指微生物,而且還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質,包括生物和化學物質。
  細胞株的篩選我們要注意加藥時間以及維持濃度:
  1.由于基因轉染到細胞內之后要一段時間才能表達出蛋白質。所以細胞株篩選時不能太早;但是也不能太晚,因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷較大,增值較慢,時間長了就會被沒有外源基因轉入的細胞所淹沒,終導致篩選不出陽性克隆,一般要在轉染24小時之后才開始加篩選。隨著細胞的代謝,濃度和活性都會下降,所以每3-5天都要更換一次篩選液。
  2.加抗生素的時機,主要是考慮插入到細胞基因組的抗性基因是否已經得到表達。一般是轉染48小時后加入抗生素。挑出單克隆后就可以用維持濃度,一般是穩定細胞株篩選濃度的1/2。
  關于維持濃度,有人說細胞會出現對抗生素的抗性,應不斷提高其濃度。而且如果要挑選幾個陽性克隆中較高表達的克隆的話,可以調整抗生素的濃度。當然,抗性基因高表達,目的基因不一定就跟著高表達。
  此外,也需穩定細胞系構建培養液:
  加藥篩選穩定細胞株約6天左右,細胞會大量死亡,孔中只剩下的細胞*。這時會出現:
  1.死亡的細胞會裂解釋放出有害物質,導致那些有表達陽性細胞死亡,即非選擇性死亡,因此要及時換液。
  2.孔中細胞數目很少,細胞之間的信號會變得很弱,也會導致陽性細胞的狀態不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養液,再轉染后篩選穩轉細胞株過程中就可以應用這種培養基。
  3.適當增加血清濃度。
聯系方式

郵箱:xiangfbio@163.com

地址:上海市虹口區四平路710號7層

咨詢熱線

400-821-8510

(周一至周日9:00- 19:00)

在線咨詢
  • 掃一掃 微信咨詢

Copyright©2025 上海復祥生物科技有限公司 All Right Reserved    備案號:滬ICP備10013034號-2     sitemap.xml
技術支持:化工儀器網    管理登陸
在线看欧美日韩中文字幕| 亚洲一区二区三区电影在线 | 99精品热这里只有精品| 久久亚洲av午夜福利精品| 国产精品www夜色视频| 久欠精品国产77777| 青青草原免费网站在线观看| 久久久精品老熟女诱惑我| 国产精品夜色一区二区三区| 亚洲老熟妇性爽xxxx| 久久99国产精一区二区三区| 精品婷婷色一区二区三区| 久久香蕉国产线看观看网| 亚洲成a∧人片在线观看| 欧美日韩内地一区二区三区| 国精品午夜福利视频不卡| 欧美区 亚洲区 国产区| 日本午夜精品理论片A级| 国产成人三级在线观看视频| 99精品国产一区二区三区| 宅男噜66一区二区三区| 精品日韩亚洲一区二区三区| 亚洲国产中文在线视频综合| 99热免费在线观看一区| 国产精品无码av在线观看播放| 久久精品国产自产对白一区| 97精品久久久久中文字幕| 激情丝袜欧美专区在线看| 午夜影院操一操亚洲无码| 国产午夜精品一区二区三区| 尤物国产91色综合久久| 色88888久久久久久| 黄瓜视频免费版在线播放| 国产在线v欧美在线TV| 小早川在线一区二区三区| 中文字幕成人网在线播放| 思思热99re在线精品| 日韩大尺度在线免费观看| 亚洲 欧美 天堂 综合| 亚洲av色区一区二区三区| 国产成人啪精品视频免费网|